聚焦3.15：养殖海参中抗生素残留的测定方法

今年的3.15晚会“迟到”了，但没有缺席。昨晚，推迟了4个月的3.15晚会终于来了，精装修房施工质量难保证、“汉堡王”使用过期食材、“趣头条”推送非法广告、养殖海参敌敌畏成箱放……今年被点名的又不少。

不看不知道，原来海参养殖水这么深，此次3.15晚会主要曝出了有关海参养殖的5大“黑幕”：

● 大量使用敌敌畏清池

● 排回大海污染环境
● 使用抗生素兽药原粉防病
● 南方参冒充北方参
● 麦芽糊精腌泡增重

看上去全产业链没有一处能让人放心。这些行为不但严重违反了相关法规，还给环境造成了极大的危害。

记者了解到，大棚养殖海参在换水的时候，容易诱发疾病，这时就需要使用一些抗生素来预防。一位兽药店经营者告诉记者：“拌抗生素，都偷着用，有查的，污染水质。”

由于兽药原粉浓度高，使用时容易引发毒副作用，以及食品安全问题。我国兽药管理条例明确规定：禁止将兽用原料药拆零销售或者销售给兽药生产企业以外的单位和个人。

我国水产养殖滥用抗生素现状令人忧心，不仅对水质造成污染，同时水产品中抗生素残留严重，人长期摄入含抗生素残留的水产品后，药物不断在体内蓄积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生毒性作用。

土霉素、四环素和金霉素均属于四环素类抗生素，四环素类药物的毒性反应主要表现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等。还会造成过敏反应，二重感染，致畸胎作用。

为了保障人民的身体健康，利于政府对食品安全的监管，我国于2002年提出了水产品中土霉素、四环素、金霉素残留的测定方法：SC/T 3015-2002 水产品中土霉素、四环素、金霉素残留的测定。

仪器与试剂

1、仪器

高效液相色谱仪、分析天平、均质器、预处理柱：ODS C18、离心机：4000r/min、负压抽滤器。

2、试剂

乙腈：色谱级。

0.01mol/L磷酸二氢钠溶液：称取1.56g（称准至0.01g）分析纯磷酸二氢钠溶于蒸馏水中，定容至1000mL，以磷酸调pH至2.5，经微孔滤膜（0.45μm）过滤后备用。

土霉素、四环素、金霉素混合标准溶液：称取土霉素0.01g（称准至0.0001g）、四环素0.01g（称准至0.0001g），金霉素0.02g（称准至0.0001g），溶于0.01mol/L磷酸二氢钠溶液中，定容至100mL，此溶液每毫升含土霉素100μg，四环素100μg，金霉素200μg。

以上标准品均按1000IU/mg 计算，本溶液于0℃~4℃时保存，可使用一周。

土霉素、四环素、金霉素、混合标准使用溶液：移取混合标准溶液10.0mL，定容至100.0mL，得土霉素、四环素浓度为10μg/mL，金霉素浓度为20μg/mL的混合标准溶液。

以上述混合标准溶液配制土霉素、四环素标准使用浓度系列： 0.05、0.10、0.20、0.25、0.50、1.0μg/mL; 以上述混合标准溶液配制金霉素标准使用浓度系列： 0.10、0.20、0.40、0.50、1.0、2.0μg/mL。此标准使用液使用时现配。

0.5% 或1%高氯酸溶液。

甲醇：分析纯。

5%乙二胺四乙酸二钠溶液：取5g 分析纯乙二胺四乙酸二胺（EDTA-2Na）溶解定容至100mL。

正已烷：分析纯。

氮气：纯度大于99%。

实验方法

1、取样

称取5.000g± 0.001g样品，置于50mL离心管中，加入0.5%高氯酸溶液10mL(水溶液蛋白含量高的样品，用1%高氯酸溶液)，用均质器均质30s，于振荡器上振荡提取3min，以4000r/min 离心10min，取上清液于50mL试管中，向离心管中的残渣再加入0.5%高氯酸溶液5mL，重复操作一次，合并上清液。加入1mL正己烷，振荡1min后，离心，除去正己烷相；再加入1mL正己烷，振荡1min后，离心，除去正己烷相。水相用ODS-C18柱（预先用5mL甲醛、2mL5%乙二胺四乙酸二钠溶液、5mL实验用水洗过）预处理，用10mL蒸馏水洗去杂质，以5mL甲醛洗脱，收集洗脱液，40℃水域中氮气吹干，以甲醛定容至1.0mL，以0.45μm滤膜过滤，滤液备用。

2、色谱参考条件

仪器: 高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器；

色谱柱：ODS-C18，长250mm，内径4mm，粒度5.0μm；

流动相：乙腈：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（26：74）；

流速：1.0mL/min；

进样量：30μL；

检测波长：355nm；

柱温：37℃。

3、测试

分别取30μL标准使用溶液，以峰面积为纵坐标，标准样品含量为横坐标，绘制工作曲线。取试样溶液30μL，在高效液相色谱仪上测定峰面积，从工作曲线计算滤液中土霉素、四环素、金霉素的含量。

悟空K2025高效液相色谱仪

可靠

强化可靠性设计理念，采用全球高品质核心元器件，历经权威机构可靠性验证，确保系统长期稳定运行；

精准

独特的送液与进样技术，结合高灵敏度检测器与强大的数据处理软件，确保分析结果精密准确；

友好

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合规

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