ALC10黄曲霉毒素液相色谱分析仪测定花生中黄曲霉毒素含量

1 前言

花生是重要的油用、食用型经济作物,含有丰富的脂肪、蛋白质和维生素,具有很高的食用价值。我国是最大的花生生产国,花生产量约占世界的五分之二。但是花生种植、收获及储藏过程中易受真菌侵染产生强致癌物质——黄曲霉毒素(Aflatoxin, AFT),严重威胁食品安全。并且花生黄曲霉毒素超标事件时有发生,已成为我国农产品出口的障碍。

2 仪器与试剂

2.1仪器

ALC10黄曲霉毒素液相色谱分析仪；高速粉碎机；超声波；天平；离心机；固相萃取装置(带真空泵)；免疫亲和柱；氮吹仪。

2.2试剂与材料

磷酸盐缓冲溶液（PBS）；

1%TritonX-100；

甲醇：色谱纯 ；

乙腈：色谱纯；

黄曲霉毒素AFT G2，G1，B2，B1混合标准品：sigma；

样品：花生。

3 实验方法

3.1样品制备

样品粉碎：取花生样品1kg，用高速粉碎机将其粉碎，过2mm孔径试验筛，混合均匀后缩分至100g，储存于样品瓶中，密封保存。

样品提取：称取5g上述试样于50mL离心管中，加入20.0mL乙腈-水溶液(84+16)，涡旋混匀，置于超声波中振荡20min，在6000r/min下离心10min，取上清液。

样品净化：准确移取4mL上述上清液，加入46mL1% TritonX-100的PBS，混匀。

免疫亲和柱内的液体放弃后，将上述样液移至50mL注射器筒中，调节下滴速度，控制样液以1mL/min~3mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后，往注射器筒内加入2×10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后，用真空泵抽干亲和柱。脱离真空系统，在亲和柱下部放置10mL刻度试管，取下50mL的注射器筒，2×1mL甲醇洗脱亲和柱，控制1mL/min~3mL/min的速度下滴，再用真空泵抽干亲和柱，收集全部洗脱液至试管中。在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。

3.2标准品制备

取标准品用流动相稀释成一系列标准溶液工作液。(含AFT B1 和AFT G1浓度为 0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL，AFT B2 和 AFTG2浓度为0.03ng/mL、0.15ng/mL、0.6ng/mL、1.5ng/mL、3.0ng/mL、6.0ng/mL、12ng/mL 的系列标准溶液)。

3.3仪器方法

a) 流动相:A相，水；B相，乙腈-甲醇(50+50)；

b) 等梯度洗脱条件：A，68%；B，32%；

c) 色谱柱：C18柱(柱长150mm，柱内径4.6mm，填料粒径5μm)；

d) 流速：1.0mL/min；

e) 柱温：40 ℃；

f) 进样量：50μL；

g) 激发波长：360nm；发射波长：440nm。

4 测试结果

4.1实验结果

4.2结论

使用ALC10黄曲霉毒素液相色谱分析仪测定花生中黄曲霉毒素G2，G1，B2，B1线性良好。黄曲霉毒素G2，G1，B2，B1的检出限均符合国标要求。

参考文献

[1] GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

[2] GB 2761-2017 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量