电位滴定法测定葡萄酒中还原糖

方法原理：

根据国标GB/T5009.7-2008中葡萄酒中还原糖的测定方法进行修改。定量且过量的碱性溶液中的硫酸铜(斐林试剂)由糖的醛基被氧化，铜(II)在碱性环境生成铜的氢氧化物，加热后作为氧化物析出，生成砖红色的氧化亚铜沉淀：

还原糖 + Cu2+ + OH - →Cu2O↓ + Cu2+(exc.)

过量的Cu(Ⅱ)的少量过量的碘化钾(KI)，在酸性环境中，随之形成碘：

Cu2+(exc.) + KI + H+ → I2 + Cu+

然后用硫代硫酸钠滴定反应生成的碘，其中消耗的硫代硫酸钠正比于加入到样品中过量的铜(II)，并因此创建微量糖含量的标准曲线：

I2 + 2 Na2S2O3 → 2 NaI+ Na2S4O6

仪器配置和附件：

- TITREX中央模块。

- 1号自动滴定管，滴定剂试剂用量。

- 2号自动滴定管，添加斐林试剂A(硫酸铜)

- 两个蠕动泵，分别添加碘化钾和硫酸溶液

- 一个添加斐林试剂B的蠕动泵

- 汉密尔顿氧化还原复合电极

- 打印机EPSON LX300+(可选)

根据自动化程度的所需的配置，可提供：

- T9216，16位恒温自动进样器。

如果不使用恒温自动进样器，需要手动操作，氧化样品时需要以下配件：

- 加热板

- 不锈钢支架，高硼硅玻璃瓶

- 不锈钢冷却装置

所需试剂

- 滴定剂：硫代硫酸钠0.5 M

- 斐林试剂A

- 斐林试剂B

- 硫酸25%w / v

- 碘化钾(KI)30%w / v

- 无水葡萄糖(有关标准编制)

- 无水果糖(有关标准编制)

- 沸石

注意事项：

- 以下所示的方法中，对滴定剂的浓度进行了优化，但是在实际的实验中，也可以使用浓度更小的硫代硫酸钠溶液(0.25M)。

- 由于该方法涉及使用到校准曲线，没有必要对Na2S2O3溶液和斐林试剂A的浓度进行标定。

样品制备：

取100mL葡萄酒或葡萄汁，过滤或离心分离几分钟。而后使用的玻璃移液管取出5毫升的样品(或标准)。还原糖含量超过25克/升的样品应适当稀释，使用微量移液管，取少量的样品(如胰岛素剂量为1毫升，以1:5的比例进行稀释)。

配制标准：

同样准确取5ml的标准溶液，标准溶液为还原糖浓度分别为0，5，10，15，20和25克/升，建立还原糖的标准曲线。首先称取葡萄糖12.5克和12.5克果糖(1:1)，得到标准储备溶液，然后逐一进行稀释，得到5种不同浓度的标准曲线。

注意事项：

- 标准溶液配制好后，必须存储在冰箱中。以这种方式保存的标准是至少可以保存6个月。超过这个期限后，若再使用，需对标准浓度进行标定。

- 配制标准液的葡萄糖和果糖，必须是无水葡萄糖和果糖。

方法设定：

1、在“新方法”中编辑标准程序，选择“还原糖”的分析方法类型。

2、填写关于滴定管以及移液泵的相关参数，保存方法。

3、在“加载方法”或在“首选项”中进行调用方法。

样品和标准品的氧化和标定：

首先使用滴定管添加斐林试剂A，使用移液泵添加B，按照相应的程序，在0-25克/升的范围内的校准和测量时，两种物质的添加量分别是15和10mL。使用自动进样器，您可以完全自动完成这个过程。

在每个滴定杯中，使用移液管加入5mL的标准品或待测样品，而后进行加热氧化。它可以通过两种方式来完成：将滴定杯放置在8个位置的不锈钢支架上，放在加热板上加热，沸腾后，保持2分钟，为避免爆沸，可在滴定杯中加入几粒沸石。然后将样品冷却，使用相应的滴定程序进行滴定。

样品和标准品，用硫代硫酸钠滴定之前需通过移液泵加入25%的硫酸和30%的KI。滴定开始前由于碘单质的存在，样品溶液成褐色，滴定结束后样品溶液为无色。

建立校正曲线：

准备6个玻璃滴定杯，其中1个为空白测试，其余5个为5个标准浓度系列溶液。添加几粒浮石，煮沸，氧化，冷却后加入相应的25%的硫酸和30%的KI。使用还原糖专用程序进行滴定，所有的标准滴定结束后，显示屏将显示标准曲线，存储所有的标准曲线。在结果异常的情况下，可以编辑某个点的标准或重复标准的滴定。

重要事项：

- 必须进行标准溶液的滴定，除了可以校验菲林试剂和标准溶液外，还方便具体样品还原糖浓度的计算。

注意事项：

- 如果样品中还原糖含量较低，例如小于10g/L，这时应在在0-10 g/L的范围内创建标准曲线。除空白外，标准系列浓度为2，4，6，8，和10 g/L。在这种情况下，在标准溶液和样品中，加入5mL斐林试剂A和7.5mL的斐林试剂B，用0.25N硫代硫酸钠进行滴定。

- 标准品必须是无水葡萄糖和果糖

结果：

本实验中所提供的结果以g / L的还原糖表示。