凯氏定氮法测定大豆肽中蛋白质含量

1 前言

大豆肽粉是一种由2-6个氨基酸组成的、分子量在200-800 Dalton 的混合肽产品。与原蛋白相比，大豆肽粉具有很好的水溶性、持水性、起泡性，能在pH2-10的任何酸碱条件下完全溶解。大豆肽粉能与其它食品配料完全溶合，并保持各自原有的物化及营养特性。与原蛋白和同组成的氨基酸制剂相比，大豆肽粉更易被人体吸收，它可不经胃肠消化，直接进入小肠被吸收，而且不受身体状况所影响。

大豆肽的分级标准中，粗蛋白含量作为其中一个重要的指标。因此测定大豆肽的蛋白质含量具有重要意义。
2 实验部分

2.1原理

根据国标《GB/T22492-2008大豆肽粉》中大豆肽粉在浓硫酸和催化剂的共同作用下，由有机态的氮转化为氨态氮。加碱蒸馏后，用硼酸吸收后，再以硫酸标准滴定液进行滴定。

2.2 仪器与试剂、器具

2.2.1 K1100F全自动凯氏定氮仪(济南海能仪器股份有限公司)。

2.2.2 SH420F石墨消解仪(济南海能仪器股份有限公司)。

2.2.3 硫酸 分析纯，c(HCL)=0.1mol/L，标准滴定液。

2.2.4 硼酸 分析纯，质量分数2%。

2.2.5 氢氧化钠 分析纯，质量分数40%。

2.2.6 溴甲酚绿-甲基红混合指示剂 将溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(1g/L)按5+1体积比临时混合摇匀备用。

2.2.7 催化剂片 3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片

2.2.8 50ml量筒

2.2.9 称量瓶

2.3 实验部分

2.3.1取样：取0.5g左右的样品，称量纸包好一并投入消化管中，加一片催化剂片（或者3g硫酸钾、0.2g硫酸铜），加入10ml浓硫酸。

2.3.2消解：利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消化过程采用直线升温模式，逐渐升温至420度，消解1小时。

2.3.3 待消化管内溶液冷却至室温后，将消化管放置于定氮仪上。定氮仪设置程序如下：

硼酸：35ml

碱：40ml

蒸馏时间：5min

2.3.4 仪器自动滴定并给出计算结果。

蛋白质含量  P%=N（%）×6.25

式中：M-标准酸摩尔浓度（mol/L)

W-样品质量（g）

V0-空白样滴定标准酸消耗量（mL）

V-样品滴定标准酸消耗量（mL），精确到小数点后四位

3 结果与讨论

大豆肽中蛋白质含量作为一个重要的分级标准: