凯氏定氮法测定破伤风抗毒素中的蛋白氮含量

1 前言

破伤风抗毒素是由破伤风类毒素免疫马所得的血浆，经胃酶消化后纯化制成的液体抗毒素球蛋白制剂，用于预防和治疗破伤风梭菌引起的感染。其中蛋白质含量是其需要检定的指标之一，本实验参照药典中的方法使用全自动凯氏定氮仪对其蛋白质含量进行测定。

2 仪器与试剂

2.1仪器

K1100F全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪，分析天平。

2.2试剂

硫酸（分析纯），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1样品制备

3.1.1非蛋白氮供试品溶液的制备

精密量取供试品2mL，加水14mL，10%钨酸钠溶液2mL，0.33moL/L硫酸溶液2mL，摇匀，静置30分钟，过滤，弃去初滤液，取续滤液作为非蛋白氮供试溶液。

3.1.2总氮供试品溶液的制备

取混合好的供试品，精确量取2mL，置10mL容量瓶中，用水稀释到刻度，作为总氮供试品溶液。

3.2取样

分别精确量取1mL制备好的总氮溶液及2mL非蛋白氮溶液加入消化管中，各加入0.3g硫酸钾与30%硫酸铜水溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml。

3.3消解

4 测试结果

4.1实验结果

表3 破伤风抗毒素中氮含量的测试数据

蛋白氮含量=（7.05-0.07）×6.25=43.625mg/mL

4.2结论

从实验结果可以看到，采用K1100F凯氏定氮仪可以准确的检测破伤风抗毒素中的总氮含量。由于样品中非蛋白氮含量较低，因此可能会影响结果平行性。

参考文献

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[ M ] . 四部. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 附录0731蛋白质含量测定 第一法 凯氏定氮法