凯氏定氮法测定疫苗中蛋白质含量

1 前言

疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生物制品。而疫苗中大都会含有大量蛋白质。常规的蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法，其中以凯氏定氮法应用最为广泛。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。下面以禽流感疫苗为例，采用《中国药典》2015年版中氮测定法第三法以全自动凯氏定氮仪进行实验，操作简单，测得结果平行性良好。

2 仪器与试剂

2.1仪器

K1100F全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪

2.2试剂

硫酸（分析纯）、硼酸（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、溴甲酚绿-甲基红混合指示剂、催化剂片（3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片）、0.1mol/L硫酸标准滴定液等。

3 实验方法

3.1取样

精确量取2ml样品放入消化管中，并用纯水冲洗消化管壁，防止残留，加一片催化剂片（或硫酸钾3g与硫酸铜0.2g），再加硫酸10mL。同时做空白实验。

3.2消解

利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消解过程设定消解温度参数如下表：

4 结果与讨论

4.1实验结果

仪器自动滴定并计算，计算公式如下：

式中：C-标准酸摩尔浓度（mol/L)

V_样-样品体积（mL）

V₀-空白样滴定标准酸消耗量（mL）

V-样品滴定标准酸消耗量（mL）

6.25-样品蛋白系数

4.2实验结论

通过以上测得数据可知，利用全自动凯氏定氮仪测定疫苗中蛋白质含量平行性良好，且具有操作简单,安全性高，节省人力等优点。