凯氏定氮仪测定疫苗中蛋白质含量

1 前言

疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生物制品。生物制品，是指用微生物或其毒素、酶，人或动物的血清、细胞等制备的供预防、诊断和治疗用的制剂。预防接种用的生物制品包括疫苗、菌苗和类毒素。其中，由病菌制成的为菌苗；由病毒、立克次体、螺旋体制成的为疫苗，有时也统称为疫苗。不管是哪一种疫苗，里面都会含有大量蛋白质。下面以禽流感疫苗为例，为大家介绍一下疫苗中蛋白质含量测定的方法。

2 实验部分

2.1原理

疫苗中的有机态氮在浓硫酸和催化剂的共同作用下，转化为氨态氮。加碱蒸馏后，用硼酸吸收后，再以硫酸标准滴定液进行滴定。

2.2 仪器与试剂、器具

2.2.1 K1100F全自动凯氏定氮仪(济南海能仪器股份有限公司)。

2.2.2 SH420F石墨消解仪(济南海能仪器股份有限公司)。

2.2.3 硫酸 分析纯，c(HCL)=0.1mol/L，标准滴定液。

2.2.4 硼酸 分析纯，质量分数2%。

2.2.5 氢氧化钠 分析纯，质量分数40%。

2.2.6 溴甲酚绿-甲基红混合指示剂 将溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(1g/L)按5：1体积比临时混合摇匀备用。

2.2.7 催化剂片 3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片

2.2.8 50ml量筒

2.2.9 称量瓶

2.3 实验部分

2.3.1取样：精确量取2ml样品放入消化管中，并用纯水冲洗消化管壁，防止残留，加催化剂片（或者3g硫酸钾、0.2g硫酸铜），加入8ml浓硫酸。

2.3.2消解：利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消化过程采用曲线升温模式，设置参数如下：

2.3.3 待消化管内溶液冷却至室温后，将消化管放置于定氮仪上。定氮仪设置程序如下：

稀释水：30ml

硼酸： 25ml

碱：   30ml

蒸馏时间：5min

2.3.4 仪器自动滴定并给出计算结果。

3 结果与讨论

式中：M-标准酸摩尔浓度（mol/L)

V总-样品体积（mL）

V0-空白样滴定标准酸消耗量（mL）

V-样品滴定标准酸消耗量（mL），精确到小数点后四位

6.25是蛋白质系数

注意事项

1.消解过程中要先将水分挥发完全，以防止爆沸，喷溅。