凯氏定氮仪测定针剂中真蛋白含量

1 前言

众所周知，凯氏定氮法所测定的氮包括有机态的氮以及无机态的氮。而对于一些针剂等需要测定真蛋白的样品而需要进行特殊的处理，将样品中的非蛋白氮进行测定，其差值则为真蛋白氮，从而可以计算得到真蛋白值，这里我们用到的是钨酸沉淀法。

2 实验部分

2.1原理

根据《中国药典2015版》中的规定。采用钨酸沉淀法将真蛋白进行沉淀，测得非蛋白氮含量。

2.2 仪器与试剂、器具

2.2.1 K1100F全自动凯氏定氮仪(济南海能仪器股份有限公司)。

2.2.2 SH420F石墨消解仪(济南海能仪器股份有限公司)。

2.2.3 硼酸 分析纯，质量分数2%。

2.2.4 氢氧化钠 分析纯，质量分数40%。

2.2.5 亚甲基蓝-甲基红混合指示剂 将亚甲基蓝乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(2g/L)按1：1体积比临时混合摇匀备用。

2.2.6 钨酸钠 分析纯  质量分数10%

2.2.7 稀硫酸 0.33mol/L

2.2.8 硫酸标准酸 0.1mol/LH+

2.2.9氯化钠 分析纯 质量分数0.9%

2.2.10 移液管

2.3 实验步骤

2.2.1总氮样品制备：精密量取供样品5ml，用0.9 %氯化钠溶液定量稀释至100ml,制成每 lml中含氮量约 lmg的溶液，精密量取 lml，作为总氮供试品溶液进行测定 。

2.2.2非蛋白样品制备：精密量取2ml样品, 置20ml量瓶中，加水14ml,加10 %钨酸钠溶液2.0ml，0.33mol/L硫酸溶液2.0ml，加水至刻度，摇匀，静置30分钟，滤过，取滤液5ml。

2.2.3取样：消化管中各加入0.3g稀硫酸钾，10滴30%的硫酸铜溶液。

2.2.4消解：利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排   

气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消化过程采用曲线升温模式，设置参数如下：消化过程采用曲线升温模式，设置参数如下：

注意：如果加大取样量，需要缓慢升温。再次升温以样品不冒泡冲样为准。如果消解过程中样品剧烈沸腾冒泡，立即停止加热。

2.3.5 定氮仪设置程序如下：

稀释水：30ml

硼酸：25ml

蒸馏时间：5min

2.3.6 仪器自动滴定并给出结果。

3 结果与讨论

式中：C-标准酸摩尔浓度（mol/L)

V0-空白样滴定标准酸消耗量（mL）

Vx1-全氮样品滴定标准酸消耗量（mL），精确到小数点后四位

Vx2-全氮样品滴定标准酸消耗量（mL），精确到小数点后四位

n-稀释倍数

注意：

（1）如果样品蛋白质含量超过10%，应加大稀释倍数。10%钨酸钠溶液及稀硫酸溶液用量相应的按比例增加，使溶液中钨酸浓度保持1%。

（2）全氮含量以及非蛋白氮含量可用同一空白体积。