全自动机械臂固相萃取仪－高效液相色谱法检测水质中苯并（a）芘残留量
1 前言
水是生命之源，人们生活和生产中都离不开水，水质的优劣与人类的健康息息相关。多环芳烃（PAHs)是指两个或两个以上的苯环按线性、角状或簇状方式稠合在一起的一类中性或非极性有机化合物，可分为芳香稠环型及芳香非稠环型。PAHs在环境中含量甚微但分布广泛，一些PAHs中除含有致癌和突变的成分外，还含有多种促进致癌的物质，对人体健康产生很大的威胁。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测水质中苯并（a）芘农药残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能精准的控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。
2 仪器与试剂
2.1仪器
SPE400全自动机械臂固相萃取仪；HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪；分析天平；其他常规玻璃仪器；滤膜（有机相，0.22μm）。
2.2试剂及耗材
实验用水应符合GB/T6682中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为色谱纯。
正己烷（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；十氟联苯（纯度：99%）；二氯甲烷（色谱纯）；硫代硫酸钠。
固相萃取柱：C18，1000mg/6ml。标准溶液：苯并芘100μg/mL，乙腈作为溶剂。
无水硫酸钠：在400℃下烘烤2h，冷却后，贮于磨口玻璃瓶中密封保存。
氯化钠：在400℃下烘烤2h，冷却后，贮于磨口玻璃瓶中密封保存。
20.0mg/L苯并芘标准溶液：质量为200gm/L的乙腈溶液，取其1mL于10mL容量瓶取中，用乙腈稀释至刻度即可，在4℃下冷藏。
1000μg/mL十氟联苯标准贮备溶液：称取十氟联苯0.025g，于25mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度即可。
淋洗液：二氯甲烷/正己烷（1+1）混合溶液（V/V）。
干燥柱：长250mm，内径10mm玻璃柱；柱下端放入玻璃纤维，加入10g无水硫酸钠。
3 实验方法
3.1取样
采集样品于预先洗净烘干的采样内，并注满。若水样中存在残余氯，则需加入在每升样品中加入80mg硫代硫酸钠除氯。
3.2样品制备
在水样中加入5g氯化钠和10ml甲醇，及50μL十氟联苯溶液，混匀备用。
3.3固相萃取柱净化（C18柱）
表1 固相净化条件
3.4脱水及浓缩
先用10mL二氯甲烷预洗干燥柱，加入上述洗脱液过柱，再加入2mL二氯甲烷洗柱，收集流出液。用氮吹仪进行浓缩至1.0mL，加入乙腈3mL，再次浓缩至0.5mL以下，定容至0.5mL，待测。
3.5色谱测定条件
色谱柱：ODS，粒径5μm，柱长250mm，内径4.6mm；
流速：1.2mL/min；
进样体积：10μL。
流动相：A乙腈；B水，梯度如下表：
表2 梯度表
检测波长：苯并（a）芘 最大吸收波长295nm。
3.6标准曲线的绘制
取一定量苯并芘标注使用液和十氟联苯标准使用液于乙腈中，制备浓度分别为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μg/mL，贮存在棕色小瓶中，于冷暗处存放。将5种浓度的标准使用液通过定量环注入10μL进入液相色谱，得到各不同浓度的苯并芘色谱图。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3.7样品及空白的测定
取同样量的样品注入高效液相色谱仪中，记录色谱峰的保留时间和峰面积。对应标准曲线，得到样品中苯并芘的含量。在分析样品的同时，以蒸馏水代替水样，作为空白试验，按照样品测定的相同步骤进行分析，检测分析果过程中是否有污染。
4 实验结果
4.1计算公式
ρ——样品中苯并芘的质量浓度，μg/L;
ρi——从标准曲线中查的组分的质量浓度，μg/L;
V1——萃取液浓缩后的体积，μL;
V——水样体积，mL.
4.2结论
采用SPE400全自动机械臂固相萃取仪可以快速对样品提取液进行净化和富集，可做到无人看守、批量处理，省去实验员繁琐的加液取液等人工操作，方便快捷。采用SPE400全自动机械臂固相萃取仪对样品提取液可以精准的控制进样、加液等流速，有利于固相小柱进行萃取分离，从而实现较好的样品检测重复性。
参考文献
[1]《HJ 478-2009 水质 多环芳烃的测定 液液萃取和固相萃取高效液相色谱法》[S].
