全自动机械臂固相萃取仪－高效液相色谱法检测猪肉中13种磺胺类药物残留量

1 前言

近年来，越来越多的研究结果表明，磺胺类药物特别是磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基异恶唑等残留对人体的危害主要表现为“致癌、致畸、致突变”作用，引起过敏、中毒和导致耐药性菌株产生，以及引起造血系统障碍、急性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血等。加强磺胺残留的检测及监控是控制兽药残留发生的重要措施之一。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测动物源性食品中磺胺类药物残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能精准的控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

SPE400全自动机械臂固相萃取仪；HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪；绞肉机；粉碎机；分析天平；离心机；其他常规玻璃仪器；滤膜（有机相，0.22μm）。

SPE 400 全自动机械臂固相萃取仪

2.2试剂及耗材

实验用水应符合GB/T6682中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。

乙酸乙酯（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；盐酸、正己烷、甲酸（色谱纯）、氨水。

MCX柱：60mg/3ml，或者相当。

0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL。

0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。

洗脱液：取氨水5mL,用甲醇溶解并稀释至100mL。

0.1mol/L盐酸溶液：取盐酸0.83mL，用水溶解并稀释至100mL。

50%甲醇乙腈溶液：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀释至100mL。

3实验方法

3.1取样

取适量新鲜或解冻的供试组织，采用绞碎机绞碎，并用粉碎机将其粉碎均质。

3.2提取

精确称取均质好的试料5g于聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯20mL，摇动5min，将试样分散开，在2000r/min下离心10min，取上层清液与100mL容量瓶中；残渣中再加入20mL乙酸乙酯，重复抽提一次，合并两次提取液于容量瓶中。

3.3脱脂

在容量瓶中加0.1mol/L盐酸溶液4mL，于40℃下氮吹浓缩至少3mL，转入10ml离心管中，用0.1mol/L盐酸溶液2mL洗容量瓶。并转至同一试管中。再用正己烷3mL洗容量瓶，将正己烷转至同一离心管中，晃动离心管将其混合均匀，在2000r/min下离心10min，弃去正己烷。再次用正己烷3mL洗容量瓶，转至同一离心管中，摇晃离心管将样品在溶剂中混合均匀，在2000r/min下离心10min，弃去正己烷。取下层液备用。

3.4固相萃取小柱净化（MCX柱）

表1 固相净化条件

浓缩、转化溶剂：收集洗脱液，于40℃氮气吹干；加入0.1%甲酸乙腈溶液1.0ml溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

3.5色谱测定条件

色谱柱：C18；

流动相：0.1%甲酸+乙腈，梯度如下表；

流速：1mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：270nm；

进样体积：100μL。

表2 梯度表

3.6 标准曲线绘制

精密将磺胺类药物标准品稀释成浓度为10、50、100、250、500、2500和5000μg/L系列混合标准溶液，供液相色谱使用。以测得的峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。

3.7测定

将样品按照与标准曲线绘制时相同的色谱条件进行测试，得到样品色谱峰的峰面积，根据所得的标准曲线，求出样品中磺胺类药物的浓度。

4结果计算

试样中磺胺类药物残留量计算：

其中：X——试样中相应的磺胺类药物的残留量，单位微克每千克（μg/kg）；

C——试样中相应的磺胺类药物浓度，单位微克每毫升（μg/mL）；

V——溶解残余物所用0.1%甲酸乙腈溶液体积，单位毫升（mL）；

m——供试样品质量，单位为克（g）；

参考文献

[1] GB 29694-2013食品安全国家标准 动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定 高效液相色谱法[S].