索氏提取仪测定灵芝粉中多糖含量

1 引言

灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一。其有多方面的药理活性：能提高机体免疫力、加速血液微循环、提高血液供氧能力、降低机体静止状态下的无效耗氧量等。其提取是采用水提醇沉淀法，该热水提取是在索氏提取仪中完成；而含量测定使用的是苯酚-硫酸法结合紫外分光光度计，灵芝多糖在酸性环境下水解为单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，在特定波长下，以比色法测定。

2 实验部分

2.1 实验仪器及试剂

索氏提取仪 SOX406（济南海能仪器股份有限公司）；紫外可见光-分光光度计i8（济南海能仪器股份有限公司）；分析天平；离心机；干燥器；容量瓶50ml/10ml若干。

实验用水应符合GB/T6682中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。

硫酸；苯酚；乙醇；葡萄糖；滤纸；脱脂棉。

2.2 实验步骤

1.仪器准备：请参照说明书，清洗溶剂杯。

2.取样：将样品进行粉碎，精确称取样品约2.0g左右（记为m），并用双层滤纸包包好，放入滤纸筒内。

3.第一阶段提取：加入抽提溶剂水60mL，打开冷凝水，启动脂肪测定仪406。设置第一阶段萃取时间2h；萃取温度140℃；实验结束完，将萃取液收集到烧杯内，并用少量蒸馏水由上端萃取口分多次淋洗样品，并入到烧杯内，溶剂杯内换入新的蒸馏水再次进行萃取。再重复此操作两次。

4.浓缩：将烧杯置于带有石棉网的电炉上烘干至少量水时，在进行水浴烘干。

5.醇沉淀：将残渣用5ml水溶解，边搅拌边缓慢地加乙醇75ml，摇匀，在低温环境下静置12小时，离心，弃去上层清液，沉淀物用热水溶解并转移至50ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀。

6.苯酚溶液配制：称取10.0g苯酚置于200ml容量瓶中，加水定容，置于棕色瓶中，避光保存。

7.葡萄糖溶液配制：称取葡萄糖0.1g溶于100ml容量瓶中，并定容。取其中10ml溶液于100ml容量瓶中，并定容，摇匀得0.1mg/ml溶液。

8.标准曲线建立：取5个10ml容量瓶，向其中加入0.0,0.2,0.4,0.6,0.8ml葡萄糖溶液，依次加水1ml，苯酚1ml，浓硫酸5ml，振摇5min，置于40℃水浴15min，放冷定容至10ml，用紫外-可见分光光度法在490nm波长处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

9.样品测试：取样品0.5ml，按9中步骤进行依次加入各种试剂，进行测定。从标准曲线上，读出其浓度C(μg/ml)。

10.计算结果：根据药典规定，灵芝以无水葡萄糖计，可根据如下公式进行计算，

增重法计算提取物含量：

3 结果分析

标准曲线 C=-1.556+119.1×A

 4注意事项

1.该实验每阶段收集时，建议多次淋洗。

2.在萃取过程中，将样品浸入到萃取液中，可加速萃取速度。